En el cultivo de setas, uno de los factores más problemáticos a la hora de empezar cualquier cultivo casi desde el inicio es la exposición de los medios al aire ambiental. El aire externo, ya sea en medio de la naturaleza o en la propia sala de cultivo, está lleno de partículas contaminantes como mohos, bacterias, esporas de otros hongos… etcétera. Y estas partículas son prácticamente imposibles de eliminar en su totalidad. No obstante, podemos controlarlas y eliminarlas en cierto número de modo que no causen demasiados problemas, siempre por supuesto que dominemos una serie de técnicas y respetemos el nivel de asepticidad del espacio de trabajo o cultivo.
Tabla de contenidos
Partes del proceso de producción de setas que necesitan un control total del aire ambiental:
- Cultivos/clonaciones usando Agar: Es fundamental un nivel de esterilidad total a la hora de usar un medio de cultivo que contenga agar, ya hablemos de clonaciones, crecimiento de micelio o germinación de esporas. Para ello será necesario el uso de autoclaves (olla express) u hornos especiales. Cualquier partícula de polvo o espora externa que caiga sobre la superficie de agar puede arruinarnos el cultivo.
- Colonización del grano y/o proceso de «grain to grain» (G2G): De la misma forma que usando agar, puede suceder si usamos grano hidratado y esterilizado como medio de crecimiento del micelio. Este grano de cereal es una fuente súper nutritiva tanto para nuestro micelio como para cualquier bacteria o espora externa que se introduzca dentro de su recipiente. Será imprescindible el uso de buenos filtros para permitir la respiración del micelio durante la colonización sin tener contaminaciones.
- Sustratos «bulk» de crecimiento durante su incubación: Es muy importante saber que cualquier sustrato esterilizado será mucho más susceptible de sufrir contaminaciones que otro que haya sido pasteurizado. Puede acceder al siguiente enlace para saber más sobre este tema: (www.mycelior.com/esterilizacion_y_pasteurizacion). No obstante, pese a la preferencia de usar un sustrato pasteurizado es importante señalar que la sobreexposición al aire externo hará que las esporas de los hongos contaminantes germinen más rápido y en mayor número. Así mismo es de extrema importancia de mantener unos correctos niveles de humedad (cantidad de agua del sustrato) para prevenir la proliferación de bacterias, ya procedan del aire externo o se haber sobrevivido el proceso de pasteurización.
Medios y equipos para combatir las contaminaciones del aire ambiental:
- SAB o «Still Air Box»: Como se puede ver en el siguiente enlace: (www.mycelior.com/sab_still_air_box) hablamos de un habitáculo cerrado, generalmente de plástico o vidrio, cuya principal función es detener el movimiento del aire en su interior. Tiene unos accesos en un lado compuestos por dos guantes donde introducir las manos y poder manejar los objetos de su interior. Por el lado contrario o por su parte superior tiene una abertura para introducir o sacar los objetos de trabajo. Puede hacerse en casa por menos de 20 euros y con materiales convencionales que se encuentran en cualquier tienda de bricolaje. Para eliminar los contaminantes del aire de su interior se rocían sus paredes y techos con solución desinfectante a base de lejía al 10% y se mantiene sin actividad durante 10-15 minutos para que haga efecto. Esto hace que los contaminantes del aire pasen al agua y por gravedad caigan a la parte inferior de la caja.
- Campana de flujo laminar: Como se puede ver en el siguiente enlace: (www.mycelior.com/campana_flujo_laminar) hablamos de una caja rectangular, generalmente de madera, con un filtro HEPA de alto rendimiento en uno de sus lados y un ventilador centrífugo en su parte superior o trasera. El ventilador aspira el aire externo hacia su habitáculo interno, el cual por diferencia de presión sale en régimen laminar hacia el exterior atravesando el filtro HEPA, el cual impide el paso de más del 99’99 de partículas de más de 0,3 micras (entre ellas, cualquier espora o bacteria). Esta campana se usa en habitaciones bien desinfectadas colocándola frente a las manos del trabajador, recibiendo todo el aire de cara a los objetos que éste sostenga. Pese a que puede realizarse de forma casera, tanto el filtro HEPA como el ventilador centrífugo suelen ser bastante caros, superando el conjunto los 300 euros, según sus diseños y tamaños. En el mercado las campanas completas son bastante más caras.
- Sprays desinfectantes: Existen en el mercado reconocidos sprays desinfectantes que reducen los contaminantes del aire por debajo del 5-10% inicial, como por ejemplo los sprays de la marca «Oust». También pueden usarse soluciones caseras a base de ácidos y/o soluciones químicas que desinfecten paredes, suelos y techos de una habitación cerrada durante un espacio de tiempo y hagan que los contaminantes caigan al suelo de forma similar a como ocurría en el interior de un SAB.
- Vestimenta apropiada e higiene: Es indispensable el uso de vestimenta de laboratorio, guantes y mascarillas sanitarias (preferiblemente desechables) y calzado apropiado y limpio. Con respecto a la higiene propia, es importante recoger y cubrir el cabello y lavar con agua y jabón cualquier parte del cuerpo (cara, brazos, o el propio pelo…) que pueda quedar expuesta al aire ambiental. Se sorprendería de la cantidad de contaminaciones que aparecen en un cultivo de forma directa provocadas por bacterias de nuestro propio cuerpo.
- Movimientos de aire: Para terminar, hay que tratar de mover el aire ambiental lo menos posible. Se debe respirar con suavidad, realizar movimientos pausados, no hablar ni fumar, mantener puertas y ventanas cerradas en todo momento y, aunque parezca mentira, no encender radios ni altavoces de ningún tipo.
Hola, recomendais la desinfección del aire mediante luz UV o purificadores de aire? Estos últimos así como los de filtro Hepa mueven el aire y generan corrientes que podrian ser más perjudiciales, no?
En general nunca recomendamos la desinfección/purificación del aire ambiental. Lo que sí recomendamos es trabajar en unas instalaciones limpias. Durante la fructificación no hace falta desinfectar el aire de la sala. Durante la incubación (de sustratos pasteurizados en bolsas microperforadas, principalmente) sí que sería interesante que el aire estuviera lo más limpio posible – para sustratos esterilizados, confiamos más en unos buenos filtros en las propias bolsas.
El único aire que bajo nuestro punto de vista debe estas totalmente limpio y filtrado es el que sale de las campanas de flujo laminar en laboratorio (para la inoculación de sustratos esterilizados, placas petri y Spawn).